分析方法開發(fā)的一般流程!?（建議收藏）
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在現(xiàn)代科學研究、產(chǎn)品開發(fā)以及質量控制領域，分析方法開發(fā)是確保數(shù)據(jù)準確性、產(chǎn)品質量穩(wěn)定性的關鍵環(huán)節(jié)。從藥物研發(fā)中的成分檢測，到化工生產(chǎn)的質量監(jiān)控，再到食品、環(huán)境領域的安全評估，精準可靠的分析方法都是不可或缺的基礎。我們深知分析方法開發(fā)的復雜性與重要性。下面小編將基于質量源于設計(QbD)理念，結合實際應用場景，系統(tǒng)闡述分析方法開發(fā)的一般流程，為科研工作者和質量控制人員提供專業(yè)參考。?
一、明確分析方法的目的與關鍵質量屬性?
分析方法開發(fā)的首要任務是清晰界定其目的，這直接決定了后續(xù)流程的方向與重點。分析方法的目的主要分為兩類：樣品放行檢測與工藝過程控制。?
(一)樣品放行檢測?
樣品放行檢測旨在判斷產(chǎn)品是否符合既定質量標準，是產(chǎn)品進入市場前的關鍵把關環(huán)節(jié)。在此場景下，分析方法需具備極高的準確性、可靠性和專屬性，確保只有符合質量要求的產(chǎn)品才能被放行。例如在制藥行業(yè)，藥品放行檢測需精確測定有效成分含量、雜質種類及限度等，任何偏差都可能影響藥品療效與安全性。?
(二)工藝過程控制?
工藝過程控制側重于在生產(chǎn)過程中實時監(jiān)測關鍵指標，及時發(fā)現(xiàn)并糾正工藝偏差，保障產(chǎn)品質量的一致性。此類分析方法需具備快速響應、靈敏度高的特點，以便對生產(chǎn)過程進行動態(tài)調整。如在生物發(fā)酵生產(chǎn)中，需實時監(jiān)測發(fā)酵液的 pH 值、菌體濃度、代謝產(chǎn)物含量等，確保發(fā)酵過程處于最佳狀態(tài)。?
無論哪種目的，確定關鍵質量屬性(CQAs)都是核心步驟。CQAs 是指對產(chǎn)品質量有直接影響的物理、化學、生物學或微生物學屬性，如藥品的活性成分含量、純度、穩(wěn)定性，化工產(chǎn)品的純度、粒度分布等 。這些屬性的確定需綜合考慮產(chǎn)品特性、行業(yè)標準、法規(guī)要求以及用戶需求，為后續(xù)方法開發(fā)提供明確的質量目標。?
二、深入了解目標物理化性質?
在正式開展分析方法開發(fā)前，全面掌握目標物的物理化學性質是基礎。目標物的理化性質決定了其在分析過程中的行為，直接影響分析方法的選擇與優(yōu)化。?
(一)物理性質?
物理性質包括物質的狀態(tài)(固態(tài)、液態(tài)、氣態(tài))、熔點、沸點、密度、溶解度等。例如，對于難溶于水的目標物，在選擇溶劑和流動相時需考慮其在有機溶劑中的溶解性;對于沸點較低的揮發(fā)性物質，可能更適合采用氣相色譜法進行分析。?
(二)化學性質?
化學性質涵蓋分子的極性大小、酸堿性、光譜吸收特性、氧化還原性質、穩(wěn)定性等。極性大小影響色譜分離模式的選擇，如極性較強的化合物適合采用正相色譜或親水作用色譜;酸堿性決定了流動相 pH 值的選擇以及是否需要添加離子對試劑;光譜吸收特性則為選擇合適的檢測手段提供依據(jù)，如具有紫外吸收的物質可采用紫外 – 可見分光光度法進行檢測。而目標物的穩(wěn)定性至關重要，若目標物在高溫、光照、酸堿條件下不穩(wěn)定，則需在分析過程中采取相應的保護措施，如低溫操作、避光處理、控制流動相 pH 范圍等。?
三、確定與方法相關的流程步驟?
確定分析方法的具體流程步驟是將理論轉化為實踐的關鍵環(huán)節(jié)，需詳細規(guī)劃從樣品前處理到結果分析的每一個操作細節(jié)。?
(一)樣品前處理?
樣品前處理的目的是將樣品轉化為適合分析的狀態(tài)，包括樣品的采集、制備、提取、凈化等步驟。不同類型的樣品和分析目標，前處理方法差異巨大。例如，生物樣品(血液、組織)通常需要進行蛋白質沉淀、液 – 液萃取或固相萃取等處理，以去除干擾物質;環(huán)境樣品(土壤、水樣)可能需要經(jīng)過消解、濃縮等步驟。在確定前處理方法時，需確保其不會引入雜質或損失目標物，同時保證操作的可重復性。?
(二)儀器與試劑選擇?
根據(jù)目標物性質和分析目的，選擇合適的儀器設備和試劑。以液相色譜分析為例，需根據(jù)目標物的極性、分子量選擇合適的色譜柱(如反相 C18 柱、正相硅膠柱、分子排阻柱等);根據(jù)檢測需求選擇檢測器(紫外檢測器、熒光檢測器、質譜檢測器等)。試劑的選擇同樣關鍵，應使用高純度的溶劑、流動相添加劑和標準品，避免雜質對分析結果產(chǎn)生干擾。?
(三)操作流程制定?
制定詳細的操作流程，包括儀器參數(shù)設置、流動相配制、樣品進樣、數(shù)據(jù)采集與處理等步驟。每個步驟都需明確操作條件和注意事項，如液相色譜的柱溫、流速、梯度洗脫程序，進樣體積和進樣方式等。規(guī)范的操作流程是保證分析結果準確性和重復性的基礎。?
四、設定與發(fā)布測試相關的規(guī)格限制?
對于用于樣品放行檢測的分析方法，設定合理的規(guī)格限制至關重要。規(guī)格限制是判斷產(chǎn)品是否合格的標準，需綜合多方面因素確定。?
(一)數(shù)據(jù)來源與依據(jù)?
限度設定的依據(jù)主要包括歷史數(shù)據(jù)、行業(yè)標準、基于多批次數(shù)據(jù)統(tǒng)計學的偏差和平均值等。通過對大量歷史數(shù)據(jù)的分析，可了解產(chǎn)品質量的波動范圍，確定合理的限度區(qū)間;參考行業(yè)標準和法規(guī)要求，確保產(chǎn)品符合市場準入條件;基于統(tǒng)計學方法計算出的偏差和平均值，則能科學評估產(chǎn)品質量的穩(wěn)定性。?
(二)風險與質量平衡?
限度的設定需充分考慮患者用藥風險、CQAs 保證以及藥品生產(chǎn)過程中的物料和終產(chǎn)品控制。在制藥行業(yè)，限度設定過低可能導致大量合格產(chǎn)品被誤判，增加生產(chǎn)成本;限度設定過高則可能使不合格產(chǎn)品流入市場，危害患者健康。因此，需在風險與質量之間找到最佳平衡點，確保限度既具有嚴格的質量把控作用，又符合生產(chǎn)實際情況。?
五、全面的風險評估?
風險評估是分析方法開發(fā)中識別潛在問題、保障方法穩(wěn)健性的重要手段。通過風險評估，可確定分析步驟對精密度、準確度、線性、專屬性、靈敏度等關鍵性能指標的影響。?
(一)評估方法選擇?
常用的風險評估方法包括故障模式與影響分析(FMEA)、風險矩陣法等。以 FMEA 為例，需對分析方法的每個步驟進行潛在故障模式識別，評估故障發(fā)生的可能性、嚴重性和可檢測性，并計算風險優(yōu)先數(shù)(RPN)，根據(jù) RPN 值對風險進行排序，確定高風險環(huán)節(jié)。?
(二)綜合因素考量?
在風險評估過程中，除了考慮分析步驟本身的影響，還需納入 CQAs 和不確定性因素。例如，在液相色譜分析中，色譜柱的選擇、流動相的組成和 pH 值、進樣體積的準確性等都可能影響分析結果，需對這些因素進行全面評估。通過風險評估，可明確方法開發(fā)和驗證過程中的重點關注對象，針對性地制定控制措施，降低風險。?
六、方法優(yōu)化與驗證?
(一)方法優(yōu)化?
在方法開發(fā)過程中，常面臨各種問題，需要通過優(yōu)化來解決：?
雜質分離度問題：當雜質分離度不足或不穩(wěn)定時，可嘗試調整流動相組成(如改變有機相比例、添加緩沖鹽或離子對試劑)、更換色譜柱(選擇不同粒徑、孔徑或鍵合相的色譜柱)、優(yōu)化柱溫或流速等條件，以提高分離度。?
色譜柱壽命短：色譜柱壽命短可能是由于流動相 pH 值不合適、樣品中含有強保留物質或操作條件過于苛刻等原因導致。可通過選擇耐酸堿的色譜柱、優(yōu)化樣品前處理方法去除雜質、降低柱壓等方式延長色譜柱使用壽命。?
目標雜質保留時間飄移：保留時間飄移可能與流動相組成變化、柱溫波動、色譜柱老化等因素有關。需嚴格控制流動相配制過程，確保組成準確;穩(wěn)定柱溫;定期對色譜柱進行維護和再生。?
基線漂移：基線漂移可能由檢測器污染、流動相不純、柱溫變化等引起?？赏ㄟ^清洗檢測器、使用高純度流動相、穩(wěn)定柱溫等方法解決。?
目標雜質信號波動：信號波動可能與進樣重復性差、檢測器靈敏度變化等因素有關。需檢查進樣系統(tǒng)是否正常，定期校準檢測器，確保儀器性能穩(wěn)定。?
溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)不充分：若溶液穩(wěn)定性不佳，需優(yōu)化樣品溶液的配制方法，選擇合適的溶劑和保存條件，并通過穩(wěn)定性試驗確定溶液的有效使用期限。?
(二)方法驗證?
方法驗證是證明分析方法符合預期用途的過程，需對方法的專屬性、準確性、精密度、線性、范圍、定量限、檢測限、耐用性和系統(tǒng)適用性等性能指標進行全面驗證。驗證過程需嚴格按照相關法規(guī)和指導原則進行，確保數(shù)據(jù)真實可靠。完成驗證后，需編制詳細的驗證報告，對驗證過程和結果進行總結，為分析方法的正式應用提供依據(jù)。?
七、結語?
恒譜生分析方法開發(fā)是一個系統(tǒng)且嚴謹?shù)倪^程，從明確目的、了解目標物性質，到確定流程步驟、設定規(guī)格限制、進行風險評估，再到方法優(yōu)化與驗證，每個環(huán)節(jié)都緊密相連、缺一不可。恒譜生不僅提供高品質的色譜耗材，還為客戶提供分析方法開發(fā)解決方案。無論您有分析方法開發(fā)的需求，還是需要選擇合適的色譜耗材，歡迎隨時聯(lián)系我們的專業(yè)團隊，我們將與您攜手，共同推動分析科學的進步與發(fā)展。
發(fā)布于: 2025-06-05